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2×SYBR qPCR MasterMix图片
产品货号:
MT0017
中文名称:
2×SYBR qPCR MasterMix
英文名称:
2×SYBR Green qPCR MasterMix
产品规格:
100T|500T|10000T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本品是采用SYBR Green嵌合荧光法进行Real-Time PCR的专用试剂,将化学修饰的热启动Taq DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP、SYBR Green染料等试剂预混在一起,是一种2X浓度的单组分预混试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分方便简单,只需加入引物、模板、水即可。

2×SYBR Green qPCR Mix中的DNA聚合酶为化学法修饰的Hot Start Taq DNA聚合酶,该酶在50℃以下100%无活性,只有95℃条件下加热15分钟后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性PCR扩增,极大的提高了PCR扩增特异性。该试剂盒独特的反应缓冲液,可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。

本品配有单独的ROX内参染料,使得该试剂可应用于所有RealTime PCR机型,包括:ABI 7000/7700/7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR(Applied Biosystems);Mx3000P(Stratagene);LightCycler(Roche Diagnostics);Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad&MJ);Line-Gene(Bioer,杭州博日)等。

2×SYBR Green qPCR Mix
图:A-C为使用SYBR Green法检测10~107copy模板的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。D.重复性高,误差<±0.5Ct。

特点:
1.热启动酶采用化学修饰,100%热启动
2.单组份预混液,使用方便快捷
3.高特异性,有效抑制非特异性扩增
4.高灵敏度,可检测低丰度基因
5.适用于所有实时定量PCR仪器

产品组成:
组分100T500T10000T
2×SYBR Green qPCR Mix1ml1ml×5100ml
50×ROX Reference Dye200μl200μl4ml



储存:请避光置于-20℃或-70℃可保存3年。注:长期-20℃保存可能会出现沉淀,室温融化后混合均匀,不影响试剂性能。

注意事项:
1.2×SYBR Green qPCR Mix于-20℃保存时容易形成沉淀,可用手轻握或室温放置一段时间后,颠倒混匀待其完全融解后使用。
2.本制品请避光保存(短期6个月内使用可置于4℃),使用频率低时置于-20℃,反复冻融会使制品性能下降。
3.配制反应液时,注意避免强光照射,并于冰上操作。

使用方法:

1.根据PCR仪选择步骤A或B

A:需要添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR仪,包括:ABI PRISM7000/7700/7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR(Applied Biosystems);Mx3000P(Stratagene)等。按照如下组分配制20μl PCR反应体系:
加入物加入量终浓度
2×SYBR Green qPCR Mix10μl
50×ROX Reference Dye0.4μl
PCR Forward Primer(10μM)0.4~0.8μl0.2~0.4μM
PCR Reverse Primer(10μM)0.4~0.8μl0.2~0.4μM
DNA模板0.5~2μl
ddH2OUp to 20μl


B:无需添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR仪,包括:LightCycler(Roche Diagnostics);MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ);Line-Gene(Bioer,杭州博日)等。按照如下组分配制20μl PCR反应体系:
加入物加入量终浓度
2×SYBR Green qPCR Mix10μl
PCR Forward Primer(10μM)0.4~0.8μl0.2~0.4μM
PCR Reverse Primer(10μM)0.4~0.8μl0.2~0.4μM
DNA模板0.5~2μl
ddH2OUp to 20μl


2.进行Real-Time PCR反应,通常采用两步法,程序如下:
Stage 1:95℃15分钟*
Stage 2:95℃10s
60℃30s35~40 cycles
Stage 3:Dissociation analysis

注意:由于该酶为化学修饰的热启动Taq DNA聚合酶,必须于95℃加热15分钟才能恢复酶的活性,该热启动步骤不能缩短时间。

3.反应结束后确认Real-Time PCR的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。
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